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          2023-11-14

          肝素生產方法

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          方法一、酶解-樹脂法酶解 取100kg新鮮腸黏膜(總固體5%-7%),加苯酚200ml (0.2%),如氣溫低時可不加。在攪拌下加入絞碎胰0.5-1kg(0.5%-1%),用 300-400g/L(30%-40%)NaOH溶液調節pH8.5-9,升溫至40-45℃,保溫2-3h。pH8,再加5kg粗食鹽(5%)升溫至90℃左右,用6mol/L HCl調節pH 6.5左右,停止攪拌,保溫20min,以布袋過濾,得酶解濾液。腸黏膜[胰漿,NaOH]→[pH8.5-9, 40-45℃, 保溫2-3h]腸黏膜液[NaCl, 6mol/L HCl]→[pH8; 90℃, pH6.5]濾液吸附、洗滌、洗脫 取上述濾液冷至50℃以下,用6mol/L NaOH調節pH7,加入5kgD-254強堿性陰離子交換樹脂,攪拌5h左右,交換完畢,棄去液體,用自來水漂洗樹脂至水清,用與樹脂等體積的2mol/L NaCl,攪拌洗滌15min,棄去洗滌液,再加2倍樹脂體積的1.2mol/L NaCl洗滌2次。用約樹脂體積一半的5mol/L NaCl洗脫1h,收集洗脫液,然后用約樹脂體積的1/3的3mol/L NaCl洗脫2次,合并洗脫液。濾液[D-254樹脂, NaOH]→[pH7, 5h]吸附[NaCl]→[2mol/L→1.2mol/L, →5mol/L, →3mol/L]洗脫液沉淀、脫水、干燥 將洗脫液用濾紙漿助濾,過濾1次,澄清濾液以體積計加入用活性炭處理過的0.9倍的95%乙醇,冷處沉淀8-12h。虹吸上清液棄去,按100kg黏膜加300ml的比例向沉淀中補加蒸餾水,再加入4倍量95%乙醇,冷處放置6h,收集沉淀,用無水乙醇脫水1次,丙酮脫水2次,置P2O5干燥器真空干燥,得肝素鈉粗品。洗脫液 → 沉淀物[無水乙醇;丙酮]→[P2O5]肝素鈉粗品脫色、沉淀、干燥 用20g/L(2%)氯化鈉溶液配成100 g/L(10%)的肝素鈉溶液,以40g/L(4%)高錳酸鉀溶液進行氧化脫色,每億單位估計加入0.65mol高錳酸鉀。先將藥液調至pH8,預熱80℃,在攪拌下加入高錳酸鉀,保溫2.5h,以滑石粉助濾劑,過濾,收集濾液。將濾液調節pH6.4,用0.9倍的95%乙醇置于冷處理沉淀6h以上,收集沉淀,溶于10 g/L(1%)氯化鈉溶液中,用量按肝素鈉粗品質量收率60%-70%計,配成50 g/L(5%)肝素鈉溶液,再用4倍量的95%乙醇冷處放置6h以上,收集沉淀物,用無水乙醇、丙酮脫水,乙醚洗滌1次,置P2O5干燥器中干燥,得肝素鈉精品。腸黏膜換算成總固體7%計,收率20000U/kg,最高效價141.6U/mg。肝素鈉粗品[20g/L NaCl]→肝素鈉溶液[KMnO4]→[pH8, 80℃, 2.5h]濾液 →[pH6.4, 6h]沉淀物[無水乙醇;丙酮;乙醚]→肝素鈉精品注射劑的制備 取肝素鈉成品溶于一定量注射用水中,封口,滅菌,即得。肝素鈉精品[注射用水]→注射劑


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